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    解讀外泌體—銳賽生物為您助力高分文章(下)

    活動品牌:| | 有效期:2018.07.31-2018.10.30

    文章附圖

     

     

     

    體經典回顧

     

    自2007年首次在外體中發現mRNA和miRNA,外體相關的研究一直備受關注。有數據顯示,目前,有關外體的學術論文已超20000篇,主要研究方向有癌癥研究、神經科學、干細胞研究、生殖醫學等。

    其中研究最為熱門的當屬癌癥研究(胰腺癌,前列腺癌等),主要用于腫瘤液體活檢,即以患者的體液作為腫瘤活檢的樣本,捕捉和檢測體液中外(Exosome),運用二代測序等技術可快速準確鑒定腫瘤標志物。

    腫瘤細胞特異性標志物已逐漸成為腫瘤診斷中必不可少的檢測項目。常規的腫瘤標志物篩查可能需要進行組織活檢,通過穿刺等方式取得病人活體樣本;而液體活檢具有速度快、樣本容易獲取、痛苦/風險小等特點。

     

    體文獻都發表在哪些雜志?

     

    榮登外體文章發表數量前三甲的journal分別是Scientific Reports、PLoS One、Oncotarget,大家對于這三個雜志是不是耳熟能詳(⊙﹏⊙)b。。。Scientific Reports以253篇外體文章位列第一,PLoS One 197篇、Oncotarget 174篇。(數據更新至2017年11月15日)

     

    領域劃分方面,除綜合類雜志外,腫瘤類雜志中oncotarget鶴立雞群、心血管類中Circulation Research發表了較多數量的外體文章、干細胞類中發表較多的是Stem Cell Research & Therapy、STEM CELLS等。


     

    經典案例

     

     

    以下為外泌體應用相關文獻案例解析:

     

    肝癌細胞外體microRNA-103通過靶向連接蛋白增加血管通透性并促進轉移

     

      

     

    背景

    關于腫瘤細胞的轉移、侵襲能力研究的很多,但很少研究通過調控血管通透性而影響腫瘤轉移的機制。

     

    實驗思路

    臨床樣本-miR103:

    不同分型肝癌病人的血清樣本

    miRNA測序——qPCR驗證;復發、轉移、分期相關性分析

    miRNA-103與轉移相關、分期相關

    細胞系-miR103:

    肝癌高低轉移細胞系、正常肝癌細胞、正常內皮細胞、肝癌內皮細胞

    Cell、CM、exo中miR-103的表達(qPCR檢測)、對內皮細胞通透性的影響(調控miR-103)、血管形成

    肝癌細胞分泌的miR-103會增加血管通透性,促進腫瘤細胞對血管的侵襲


    肝原位模型:

    QGY-7703-miR103、QGY-7703-ctrl細胞肝原位模型、模型鼠血清、血清中外

    qPCR檢測、血管通透性檢測、腫瘤轉移檢測、腫瘤內血管形成檢測、MMP2檢測、腫瘤大小檢測

    肝癌細胞分泌的miR-103會增加血管通透性,促進腫瘤轉移

    細胞—外體遞送miR103:

    肝癌高低轉移細胞系、正常肝癌細胞的外體、CM及內皮細胞

    共孵育,qPCR檢測,confocal檢測

    肝癌細胞分泌的外體中miR-103可以遞送給內皮細胞


    細胞—miR103靶向調控:

    肝癌高低轉移細胞系、正常肝癌細胞的外體、CM及內皮細胞

    Confocal、WB檢測、雙熒光素酶檢測、遷移、侵襲、qPCR

    miR103促使P120、E-cad、β-cat表達降低,促進細胞離散、遷移

     

    實驗結果——臨床樣本檢測結果

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    Higher level of serum miR-103 is associated with higher recurrence rate of HCC

     

    實驗結果——肝癌細胞系miR103的表達

     

     

     

     

     

     

     

    1)The CM from the liver cells or hepatoma cells that were grown in SFM supplemented with 10% exosome-depleted FBS (10%FBS-SFM) was collected and stored at -80°C.

    2)提高腫瘤細胞內miR103的表達,相應的,CM和exo里面的miR103含量也相應增加

     

    實驗結果——體內驗證外體miR103功能

     

    1)miR103高表達腫瘤鼠血漿外體中miR103高表達,血管通透性增強,血管屏障減弱;

    2)肝內轉移增多,轉移腫瘤結節直徑較大;肺臟轉移差異不明顯;

    3) miR103高表達對原發腫瘤大小、血管生成、MMP2的表達沒有影響。

     

    實驗結果:miR103通過外體遞送給內皮細胞

     

    1)miR103高表達細胞分泌的外體遞送到內皮細胞的miR103比較高;

    2)外體分泌受到抑制時,內皮細胞中miR103含量也收到抑制;

    3)內皮細胞本身miR103表達降低時,外體遞送的miR103也受到抑制。

    肉皮4.jpg

    實驗方法:

    1)exosomes were incubated with DiIC16 (finalconcentration at 1 μM in PBS; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) for 20 min, followed by washing/spin in PBS at 110,000 g for 70 minutes twice to remove the excess DiIC16 dye。

    2)Exosomes from QGY-7703 cells that weretransfected with 50 nM FITC-tagged miR-103 were labeled with fluorescent dye DiIC16 (left panel) and then applied to treat HUVECs for 4 hours, following by imaging under a fluorescence microscope.

     

    實驗結果——miR103調控P120、E-cad、β-cat

    1)miR103高表達細胞株分泌的外體會抑制內皮細胞VE、p120、zo-1的表達

    2)miR103靶向調控VE、p120、zo-1基因


    1)miR103高表達會抑制肝癌細胞中E-CAD、p120的表達,會促進肝癌的遷移;低表達會促進你E-CAD、p120的表達,抑制細胞的遷移

     

    體的研究潛力巨大,但目前外體的應用仍然處于初級階段,體在腫瘤中的研究套路也成了國自然的新寵。銳賽生物設計多個研究方案為您的外體科研助力,期待您來電了解更多詳情!

     

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