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    索萊寶丨Western Blot整體解決方案

    活動品牌:索萊寶|Western Blot | 有效期:2018.08.22-2018.10.31

    促銷時間:2018.8.21-2018.10.31

    累計購買1000元送小米充電寶或小米手機環多買多送

    索萊寶丨Western Blot整體解決方案

    蛋白電泳 SDS-PAGE原理

    SDS是一種陰離子表面活性劑,能打斷蛋白質的氫鍵和疏水鍵,并按一定的比例和蛋白質分子結合成復合物,使蛋白質帶負電荷的量遠遠超過其本身原有的電荷,掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。因此,各種蛋白質-SDS 復合物在電泳時的遷移率,不再受原有電荷和分子形狀的影響,而只是棒長的函數。這種電泳方法稱為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(簡稱SDSPAGE)。實驗使用過程中,還加入DTT或者巰基乙醇,以打開蛋白間的二硫鍵,破壞蛋白質的四級結構。SDSPAGE最常采用垂直板不連續系統(分離膠與濃縮膠)。

    一、樣品制備

    本公司有多種用于樣品制備的組織裂解液,每款裂解液會配備一管蛋白酶抑制劑pmsf。本公司還有多種蛋白酶抑制劑供您使用。

    ·實驗試劑

    產品貨號 產品名稱

    R0010 高效RIPA_

    R0020 普通RIPA

    R0030 非變性組織細胞裂解液

    A8260 Aprotinin 蛋白酶抑制劑(抑肽酶)

    P8100 Pepstatin A 胃蛋白酶抑制劑

    P1260 (All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制劑混合物

    T8031 Trypsin inhibitor 胰蛋白酶抑制劑

    P1260 (All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制劑混合物

    539133 Protease Inhibitor Cocktail Set VI

    539134 Protease Inhibitor Cocktail Set III

    PC0030 Lowry法蛋白濃度測定試劑盒

    PC0010 Bradford蛋白濃度測定試劑盒>

    PC0020 BCA蛋白濃度測定試劑盒

    注:本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑,所以不適合于Bradford蛋白濃度測定試劑盒,請選擇BCA法或者Lowry法。

    ·蛋白提取

    產品貨號 產品名稱 說明

    R0010 高效RIPA組織/細胞裂解液 在普通RIPA的基礎上改進而來,含蛋白酶抑制劑及磷酸 酶抑制劑(配有一支PMSF)

    R0020 RIPA組織/細胞裂解液 RIPA經典配方,適于絕大多數蛋白-蛋白相互作用的免 疫實驗。組成: 50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.(配有一支PMSF) 保存: 4 ºC避光

    R0030 非變性組織/細胞裂解液 非變性條件下裂解的蛋白產物最大限度地保留了蛋白 的特性和功能,如抗原-抗體結合或酶學活性,因此 適宜于進行免疫共沉淀。

    R0050 核蛋白提取試劑盒

    BC3640 全蛋白提取試劑盒

    BC3720 植物蛋白提取試劑盒

    BC3710 全蛋白提取試劑盒(強)

    BC3711 全蛋白提取試劑盒(中)

    BC3730 磷酸化蛋白提取試劑盒

    BC3740 胞漿蛋白提取試劑盒

    蛋白含量測定是以標準蛋白作為對照,根據蛋白濃度不同,吸光值不同而達到定量的目的。有些方法是理解蛋白本身的吸光值(紫外光譜吸收法)來定量,但更多的是用染料對蛋白進行染色,利用染料與蛋白結合顯出與原染料及蛋白不同的吸光值來定量的。后一種方法應用更普遍。蛋白定量方法的選擇,應該考慮到蛋白結構(標準品選擇)、蛋白溶液內干擾物等因素的影響。

    ·蛋白定量

    產品貨號 產品名稱 組成說明

    PC0010 Bradford蛋白濃度測定試劑盒 5×G250染色液 100ml 2-8BSA(5 mg/ml) 1ml -20ºC

    PBS稀釋液 30ml 2-8 干擾物質少, Tris、糖、甘油、 巰基乙醇、氨、EDTA等均不干擾測定。

    PC0020 BCA蛋白濃度測定試劑盒 BCA Reagent 100ml 2-8Cu Reagent 3.0ml 2-8BSA (5 mg/ml) 1ml -20ºCPBS稀釋液 30ml 2-8 BCA法的顯 著優點是不受去垢劑的影響。

    PC0030 Lowry法蛋白濃度測定試劑盒 Folin酚甲試劑A 200ml 2-8Folin酚甲試劑B 5ml 2-8

    Folin酚乙試劑 20ml 2-8BSA(5 mg/ml) 1ml -20ºCPBS 稀釋液 30ml 2-8 Lowry法測定較為不受脂類物質干 擾,適于脂類含量較高的樣品測定。也能耐受相當濃度的 去垢劑如SDS

    二、蛋白電泳

    ·預制膠

    SDS-PAGE如今已形成成熟的方案,實驗室可根據自己的情況和習慣來選擇試劑。如選擇123456789全部試劑可自己配制。也可以選擇配制好的試劑。

    系號 產品貨號 產品名稱 系號 產品貨號 產品名稱

    1 T8060 TRIS 三羥甲基氨基甲烷 11 S1051 4XSDS-PAGE分離膠緩沖液(PH=8.8

    2 G8200 Glycine 甘氨酸 12 S1052 4XSDS-PAGE濃縮膠緩沖液(PH=6.8

    3 S8010 SDS 十二烷基硫酸鈉 13 P1016 4×蛋白上樣緩沖液(含β-巰基乙醇)

    4 A8080 Acrylamide 丙烯酰胺 14 P1015 4×蛋白上樣緩沖液(DTT)

    5 M8200 N,N-Methylene Bisacrylamide甲叉雙丙烯酰胺 15 D1070 1M DTT

    6 A8090 Ammonium Persulfate 過硫酸胺 16 A1030 10%過硫酸氨

    7 D8220 DTT 二硫蘇糖醇 17 T1020 1M Tris-HCL (PH6.8)

    8 M8210 β-Mercaptoethanol β-巰基乙醇 18 T1010 1.5M Tris-HCL(PH8.8)

    9 T8090 TEMED 四甲基乙二胺 19 S1010 10%SDS

    10 A1010 30%丙烯酰胺(29:1 20 T1070 5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液

    ·制膠

    凝膠配制表(一)

    分離膠12% 分離膠10% 分離膠8% 濃縮膠(3%

    總體積 10ml 10ml 10ml 5ml

    4X分離膠緩沖液(PH8.8 2.5ml 2.5ml 2.5ml 0

    4X濃縮膠緩沖液(PH6.8 0 0 0 1.25ml

    30%丙烯酰胺(29:1) 4ml 3.3ml 2.7ml 0.5ml

    ddH2O 3.4ml 4.1ml 4.7ml 3.2ml

    10%過硫酸銨 100ul 100ul 100ul 75ul

    TEMED 10ul 10ul 10ul 7.5ul

    凝膠配制表(二)

    分離膠12% 分離膠10% 分離膠8% 濃縮膠(3%

    總體積 10ml 10ml 10ml 5ml

    30%丙烯酰胺(29:1) 4ml 3.3ml 2.7ml 0.5ml

    1M Tris-HCL (PH6.8) 0 0 0 0.625ml

    1.5M Tris-HCL(PH8.8) 2.5ml 2.5ml 2.5ml 0

    10%SDS 100ul 100ul 100ul 50ul

    ddH2O 3.3ml 4.0ml 4.6ml 3.75ml

    10%過硫酸銨 100ul 100ul 100ul 75ul

    TEMED 10ul 10ul 10ul 7.5ul

    本公司的丙烯酰胺是291的,如需要定制其他規格的可以聯系我們。 為了客戶實驗方便,我們生產的SDS-PAGE凝膠制備試劑盒(P1200)和Tris- Tricine-SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒(P1320),后者主要用于小于10kd的蛋白和多肽的分離。包含了制膠的全部試劑,方便客戶操作。 如果您想節省時間,也可以使用我們的預制膠,無需配膠,直接跑電泳即可。

    ·上樣及電泳

    本公司的上樣緩沖液既有用于非變性的(P1017p1027)又有變性的(P1015P1016P1017P1018),有不同的稀釋倍數,可以滿足客戶的多種實驗需求。 電泳緩沖液既有用于普通的tris-甘氨酸緩沖系統的產品(T1070),又有用于Bis-tris這種系統的MOPS緩沖液(T1510) 蛋白marker有多種,非預染marker、預染marker、彩虹markerWestern Blot Marker。而且還有GE原裝的變性非變性marker,廣泛的分子量和用途供您選擇。

    產品貨號 產品名稱 產品貨號 產品名稱

    P1015 4×蛋白上樣緩沖液(含DTT P1016 4×蛋白上樣緩沖液(含β-巰基乙醇)

    P1018 2×蛋白上樣緩沖液(含DTT P1019 2×蛋白上樣緩沖液(含β-巰基乙醇)

    P1017 4×非變性蛋白上樣緩沖液 p1027 2×非變性蛋白上樣緩沖液

    T1070 5×Tris甘氨酸電泳緩沖液 T1510 Tris-Mops緩沖液(10×)

    PR1300-15 次高分子量蛋白質標準 15T PR1400-20 低分子量蛋白質標準(14.4-97.4KD) 20T

    PR1500-10 次高分子量蛋白質標準 10T PR1600-20 預染低分子量蛋白質(14.4-97.4KD) 20T

    PR1700-10 預染次高分子量蛋白質標準 10T PR1800-10 Western Blot Marker 10T(50ul

    PR1900 預染超低分子量蛋白marker3.3-31KD) 20T PR1910 彩虹180廣譜蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1)

    PR1920 彩虹245廣譜蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1) PR1930 彩虹245plus廣譜蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1)

    ·染色

    跑膠后的染色可以用銀染或者考染的方法,如果蛋白量少,推薦使用靈敏度高一些的銀染試劑盒(G7210),否則常規染色可以使用(P1305)和(P1300),其中P1300的優點是染色時間短,半小時內即可檢測到蛋白電泳條帶,節省了染色脫色的時間。

    產品貨號 產品名稱

    C8430 考馬斯亮藍R 250染色液

    P1300 考馬斯亮藍蛋白膠快速染色液

    P1305 考馬斯亮藍染色套裝

    G7210 PAGE凝膠銀染試劑盒

    PG00810-S Precast-Gel預制膠 變性預制膠 10 8% 10/

    PG01010-S Precast-Gel預制膠 變性預制膠 10 10% 10/

    PG01210-S Precast-Gel預制膠 變性預制膠 10 12% 10/

    PG01510-S Precast-Gel預制膠 變性預制膠 10 15% 10/

    PG41510-S Precast-Gel預制膠 變性預制膠 10 415% 10/

    PG42010-S Precast-Gel預制膠 變性預制膠 10 420% 10/

    PG82010-S Precast-Gel預制膠 變性預制膠 10 820% 10/

    PG00810-N Precast-Gel預制膠 非變性預制膠 10 8% 10/

    PG01010-N Precast-Gel預制膠 非變性預制膠 10 10% 10/

    PG01210-N Precast-Gel預制膠 非變性預制膠 10 12% 10/

    PG01510-N Precast-Gel預制膠 非變性預制膠 10 15% 10/

    PG41510-N Precast-Gel預制膠 非變性預制膠 10 4-15% 10/

    PG42010-N Precast-Gel預制膠 非變性預制膠 10 420% 10/

    PG82010-N Precast-Gel預制膠 非變性預制膠 10 820% 10/

    三、Western blot

    經過PAGE分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如**纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶或同位素標記的第二抗體起反應,經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分,此技術稱為免疫印跡(Western blot)。Western blotting檢測系統除需要過氧化物酶標記的各種二抗外,還需要配套的顯色試劑。索萊寶提供DAB顯色和ECL化學發光兩種試劑及相應試劑盒。

    ·轉膜

    MilliporePALL公司的尼龍膜和pvdf膜,具有0.22um0.45um兩種規格。 轉膜后還可以用P001210×麗春紅)檢測轉膜效果,尤其是針對NC膜效果更佳。 為了節省成本和時間,您可以選擇本公司的SW3020Western Blot膜再生液)對用過的膜進行清洗,隨后,可以使用不同的抗體進行下一輪Western Blot實驗。 膜再生液實質是在不影響膜上結合的抗原的條件下將抗體洗脫下來,實際操作中,膜類型、抗體類型、濃度及抗原特性都影響洗脫難易度。 注意:適用于 ECL和類似的化學發光試劑進行的 Western 檢測。不適用于非化學發光試劑進行的 Western檢測,例如DABNBT/BCIP

    產品貨號 產品名稱

    P0012 10×麗春紅

    SW3010 膜封閉液

    A1800 抗體稀釋液

    A1810 一抗稀釋液

    A1820 HRP標記抗體稀釋液

    A1830 AP標記抗體稀釋液

    A1840 熒光抗體稀釋液

    T1085 1×TBST

    實驗操作過程中您可以針對不同的抗體選擇上面合適的稀釋液。

    ·顯色

    Western blotting DAB檢測試劑盒 本試劑盒適合加一抗后的后續顯色。操作簡單,適合重組等高表達蛋白的檢測,其敏感性不如ECL法。

    產品貨號 產品名稱 說明

    SW1010 Western blotting (小鼠IgG)DAB顯色試劑盒 可配制250ml二抗和100ml顯色液,適合 一抗為小鼠IgG

    SW1020 Western blotting(IgG)DAB顯色試劑盒 可配制250ml二抗和100ml顯色液,適合 一抗為兔IgG

    SW1030 Western blotting(山羊IgG)DAB顯色試劑盒 可配制250ml二抗和100ml顯色液,適合 一抗為山羊IgG

    SW1040 Western blotting(小鼠/IgG)DAB顯色試劑盒 可配制250ml二抗和100ml顯色液,適合 一抗為小鼠和兔IgG

    試劑盒內容:

    1.封閉試劑:30g(可配制400ml)脫脂奶粉及其他蛋白,緩沖鹽等混合物。

    2.10倍濃縮抗體稀釋液,50ml

    3.HRP標記二抗,0.5ml,效價1500-3000

    4.20DAB濃縮顯色液,5mlA+5mlB

    Western blotting ECL化學發光檢測試劑盒 本試劑盒適合加一抗后的后續顯色。敏感性比DAB10倍。適合組織及細胞中常規蛋白的檢測,但需有暗室等相關配套條件。

    產品貨號 產品名稱 說明

    SW2010 Western blotting(小鼠IgG)ECL顯色試劑盒 可配制250ml二抗和50ml顯色液,適合一抗 為小鼠IgG

    SW2020 Western blotting (IgG)ECL顯色試劑盒 可配制250ml二抗和50ml顯色液,適合一抗 為兔IgG

    SW2030 Western blotting(山羊IgG)ECL顯色試劑盒 可配制250ml二抗和50ml顯色液,適合一抗 為山羊IgG

    SW2040 Western blotting(小鼠/IgG) ECL顯色試劑盒 可配制250ml二抗和50ml顯色液,適合一抗 為小鼠和兔IgG

    試劑盒內容:

    1. 封閉試劑:30g(可配制400ml)脫脂奶粉及其他蛋白,緩沖鹽等混合物。

    2. 10倍濃縮抗體稀釋液,50ml

    3. HRP標記二抗,0.1ml,效價12000-5000

    4. ECL顯色液,25mlA+25mlB



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    日期 數量
    2018-12 8
    2019-1 2
    2019-2 0
    2019-3 1
    2019-4 0
    2019-5 0

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    白小姐一生肖中特
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